一、主要技術(shù)參數(shù):
Nanodrop 2000c可以通過基座檢測(cè)0.5-2 ul的樣本,也可以使用傳統(tǒng)的比色皿來進(jìn)行樣本檢測(cè)。
1)基座模式:光源為氙閃爍燈,波長范圍:190-840 nm,波長準(zhǔn)確性: ±1 nm;光譜分辨率≤1.8 nm,吸光值范圍:0.02-300(等同于10 mm光程時(shí));檢測(cè)極限:2 ng/ul dsDNA,最大檢測(cè)濃度:15,000 ng/ul(dsDNA)。
2)比色皿模式:光束高度8.5mm,光程:10,5,2,1 mm;檢測(cè)極限:0.4 ng/ul dsDNA,大檢測(cè)濃度:750 ng/ul(dsDNA)。
二、主要應(yīng)用:
1、Nucleic Acid檢測(cè)
吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度檢測(cè)。
2、UV-Vis檢測(cè)
190-840nm間所有波長的吸收值及光譜。
3、A280蛋白質(zhì)定量法
280nm吸收值(換算成10mm光徑吸收值)、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì),須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)(mass extinction coefficient)方可計(jì)算。
4、BCA、Bradford及Lowry檢測(cè)
依不同呈色劑提供不同波長吸收值結(jié)果,自動(dòng)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square,待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。
*蛋白質(zhì)檢測(cè)模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑,因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深,使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,在合適時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè),以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線最多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品最多可做五重復(fù)。
*測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用2ul,每個(gè)樣品檢測(cè)后需以Kimwipes低塵擦拭紙擦拭15-20回,以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。
三、使用流程(Nucleic Acid檢測(cè)為例)
1、雙擊桌面軟件圖標(biāo)打開軟件(圖1)。

2、選擇檢測(cè)功能,如Nucleic Acid、Protein A280、UV-Vis等(圖2)。

3、對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行命名,然后選擇對(duì)應(yīng)樣品測(cè)試類型,可點(diǎn)擊下拉小箭頭選擇測(cè)試類型,包含:DNA、RNA、ssDNA、Oligo DNA、Oligo RNA。(圖3)

4、儀器校零,抬起儀器上臂,加樣品的緩沖液1 ul或2 ul到儀器的下基座上,如下圖所示(圖4)。

5、加樣完畢后,放下儀器上臂:點(diǎn)擊軟件左上角的Blank圖標(biāo)。大約5秒后,Measure按鍵由灰色變亮后,才可以抬起上臂,用無塵紙把上下基座擦拭干凈,如圖5所示。若需重新校零,可點(diǎn)擊左上角的Re-Blank圖標(biāo)重復(fù)步驟5。

6、擦拭完畢,用移液器吸取與緩沖液等量的樣品并把樣品加到儀器的基座上,并且點(diǎn)擊Measure按鍵進(jìn)行檢測(cè)。
7、每完成一次樣品檢測(cè)后,需用無塵紙清潔上下基座。樣本全部檢測(cè)完畢后,用移液器吸取蒸餾水約2-5 ul到儀器的下基座上,放下儀器上臂,等待幾秒,抬起儀器上臂,用無塵紙把上下基座擦拭干凈之后再將儀器上臂放下,回到初始狀態(tài)。
8、數(shù)據(jù)保存:點(diǎn)擊Report,選擇需保存的檢測(cè)數(shù)據(jù),保存為excel格式,用光盤刻錄數(shù)據(jù)。
注意事項(xiàng):
1、樣本檢測(cè)量參考:核酸水溶液:1 ul,純蛋白:2 ul,Bradford,BCA,Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗(yàn):2 ul,微生物細(xì)胞懸浮液:2uL。
2、最好使用精確的移液器(0-2 ul)和tip頭來取樣來保證取樣的準(zhǔn)確。如果對(duì)樣本的特征或者移液器精確性不太確認(rèn),最好使用2 ul樣本來做檢測(cè)。
3、對(duì)于所有模式檢測(cè)(包括比色皿檢測(cè)),檢測(cè)臂都必須放下。
4、同一滴液體只能做一次偵測(cè),欲重復(fù)定量同一樣品,請(qǐng)擦掉前一滴,重新取出一滴進(jìn)行檢測(cè)。
5、數(shù)據(jù)只能用實(shí)驗(yàn)室公用U盤進(jìn)行拷貝。
6、及時(shí)做好使用記錄登記。