一、儀器主要參數(shù)
流式細(xì)胞儀型號(hào)：艾森NovoCyte 2040R，雙激光（488nm，640nm）, 488nm激光器配置3個(gè)檢測(cè)通道：FITC(530nm/30)、PE (572nm/28)、PerCp (675nm/30)；640nm激光器配置1個(gè)檢測(cè)通道：APC(675nm/30)。儀器最大樣品流速：120μL/min。
二、主要應(yīng)用：
用于定性、定量分析細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的各種細(xì)胞成分；細(xì)胞的各種功能狀態(tài)，如增殖、凋亡、分化、酶活性、細(xì)胞膜通透性、氧化還原狀態(tài)、吞噬性等：
1、細(xì)胞表面標(biāo)志檢測(cè)：細(xì)胞免疫表型分析、表面蛋白分析等。
2、細(xì)胞內(nèi)蛋白檢測(cè)：細(xì)胞因子、細(xì)胞骨架分子和胞質(zhì)酶類等
3、細(xì)胞內(nèi)離子濃度檢測(cè)：H+、Na+、K+、Ca2+等。
4、細(xì)胞核成分檢測(cè)：細(xì)胞周期、DNA總量分析等。
5、細(xì)胞膜：流動(dòng)性、膜電位、膜通透性等。
6、細(xì)胞功能：如細(xì)胞死活判定、pH值、增殖與凋亡、抗藥性等。
7、基因表達(dá)：內(nèi)源及外源基因表達(dá)，熒光報(bào)告基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)染效率判定。
三、樣本制備
1、待測(cè)樣品必須為單細(xì)胞懸液，測(cè)試前經(jīng)篩網(wǎng)或細(xì)胞濾膜過濾。
2、保持樣品細(xì)胞活力，尤其細(xì)胞表達(dá)蛋白（包括細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面）分析，必須為新鮮制備的活細(xì)胞。
3、正確設(shè)立對(duì)照，包括陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
四、使用流程
1、開機(jī)
輕按電源鍵啟動(dòng)儀器，電腦上打開NovoExpressTM，待儀器初始化完成，待軟件狀態(tài)欄顯示“就緒”。
2、新建實(shí)驗(yàn)
①點(diǎn)擊主菜單“文件”→“新建”新建實(shí)驗(yàn)”；
②可用以下多種方式新建實(shí)驗(yàn)樣本或標(biāo)本：
▲選擇“實(shí)驗(yàn)管理”，右鍵點(diǎn)擊“實(shí)驗(yàn)文件名.ncf”，在本實(shí)驗(yàn)文件下新建標(biāo)本。右鍵點(diǎn)擊“標(biāo)本”，在選中的標(biāo)本下新建樣本。
▲如已有模板文件，點(diǎn)擊主菜單“文件”→“新建”→“從模板新建”，將新建有相同模板的標(biāo)本或樣本。
▲點(diǎn)擊主菜單“文件”→“保存”。
3、樣品采集
①在“實(shí)驗(yàn)管理”面板，雙擊樣本，使之成為當(dāng)前樣本；
②設(shè)置采集條件：樣本使用參數(shù)、停止條件、流速；
③將樣本管充分混勻，置于樣本架。
④點(diǎn)擊“采集”按鈕。此時(shí)樣本針會(huì)向下運(yùn)動(dòng)至樣本管內(nèi)，吸取一定體積的樣本后收回。注意：樣本管須放正，避免打針！
4、數(shù)據(jù)分析
①畫圖：根據(jù)需要選擇圖標(biāo)做圖，進(jìn)行熒光通道參數(shù)選擇與修改，圖片縮放；
②設(shè)門：根據(jù)需要選擇門類型，雙擊門的標(biāo)簽可以對(duì)門進(jìn)行重命名；
③導(dǎo)出/導(dǎo)入模板
▲在“實(shí)驗(yàn)管理”面板右鍵點(diǎn)擊標(biāo)本或樣本名稱，選擇“導(dǎo)出”→“做為模板導(dǎo)出”或者“導(dǎo)入”→“導(dǎo)入模板”
▲在標(biāo)本或樣本名稱上按住鼠標(biāo)左鍵，拖動(dòng)到另一個(gè)標(biāo)本或樣本名稱，可直接實(shí)現(xiàn)模板應(yīng)用。
④導(dǎo)出/導(dǎo)入FCS文件：
▲在“實(shí)驗(yàn)管理”面板右鍵點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)文件名稱、標(biāo)本或樣本，選擇“導(dǎo)出FCS文件”。
▲導(dǎo)入FSC文件：在“實(shí)驗(yàn)管理”面板右鍵點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)文件名稱、標(biāo)本或樣本，選擇“導(dǎo)入FCS文件”。
5、關(guān)機(jī)
平衡廢液，待電源鍵為綠色，即可輕按儀器前面板上的電源按鈕，儀器將自動(dòng)執(zhí)行關(guān)機(jī)清洗流程。關(guān)機(jī)流程結(jié)束后，電源自動(dòng)切斷，指示燈熄滅，及時(shí)關(guān)閉電腦。
注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)操作前須檢查鞘液、廢液、沖洗液和清洗液的水位；
2、樣品上機(jī)前，須提前過濾處理單細(xì)胞懸液（常用濾網(wǎng)：40μm、70μm、100μm）；
3、樣品管位置擺放正確，避免樣本針被打彎，推薦使用5 mL流式管上樣；
4、拷貝數(shù)據(jù)，需提前將U盤格式化后再使用。
5、若儀器出現(xiàn)任何故障，及時(shí)聯(lián)系工作人員。
