一、主要應(yīng)用：
Roche LightCycler480 II可進(jìn)行絕對定量、相對定量、基因分型（熔解曲線法及終點(diǎn)法）、高分辨率融解曲線分析，同時適用幾乎所有檢測模式（染料檢測、水解探針（TaqMan探針）、雜交探針、簡單探針等）；采用Therma-BaseTM熱循環(huán)專利技術(shù)和先進(jìn)的光學(xué)檢測系統(tǒng)，徹底消除邊緣效應(yīng)，保持穩(wěn)定優(yōu)異的檢測結(jié)果；可同時檢測96孔板樣品，結(jié)果通過PCR循環(huán)過程中實(shí)時熒光采集和軟件分析進(jìn)行定量和基因型的分析。出色的光學(xué)檢測系統(tǒng)可以進(jìn)行多重PCR檢測，并適用于多種檢測模式，包括：
1、非序列依賴的探針模式（SYBR Green I或其他飽和熒光染料）；
2、序列特異的探針模式（Taqman水解探針模式，雜交探針模式，簡單探針模式，分子信標(biāo)，Scorpions等模式）；
3、通過高分辨率熔解曲線分析（HRM）進(jìn)行基因掃描突變檢測，產(chǎn)物分型和SNP研究等。
二、使用流程
1、打開LightCycler480總電源，系統(tǒng)進(jìn)入自檢，自檢過程中切勿放置反應(yīng)板，自檢完畢后左側(cè)指示燈為綠色，右側(cè)指示燈為橙色。
2、按多孔板加載器按鈕，放置反應(yīng)板，此時兩個指示燈均顯示綠色。
3、開啟計(jì)算機(jī)電源，雙擊“LightCycler480 Software”圖標(biāo)，成功登陸后點(diǎn)擊“New Experiment”按鈕，進(jìn)入“New Experiment/Run Protocol”程序設(shè)置界面。
4、設(shè)置實(shí)驗(yàn)程序，依次為：按“Program Name”命名程序，按“Cycles”設(shè)置循環(huán)數(shù)，按“Analysis Mode”選擇分析模式；在“Temperature Targets”界面設(shè)置所指定程序的內(nèi)容，在“Target(℃)”處填寫目標(biāo)溫度；按“Acquisition Mode”選擇信號采集方式，按“Hold”設(shè)定持續(xù)時間，按“Ramp Rate(℃/s)”設(shè)置升降溫速率。若需增添步驟，可點(diǎn)擊“+”，點(diǎn)擊上下箭頭調(diào)整各程序順序。
5、設(shè)置完畢后，單擊“Start Run”，在跳出的對話框中命名并保存。點(diǎn)擊“確認(rèn)”，此時LightCycler480儀器上的兩個指示燈均為綠色閃動狀態(tài)。
6、實(shí)驗(yàn)運(yùn)行完畢后，點(diǎn)擊界面左側(cè)的“Analysis”按鈕分析數(shù)據(jù)，“Create new analysis”窗口顯示分析方法，“Open existing analysis”窗口顯示已分析結(jié)果。點(diǎn)擊“Calculate”生成結(jié)果，點(diǎn)擊右側(cè)的保存。
7、點(diǎn)擊左側(cè)工具欄中“Report”，在“General”和“Detailed”兩欄中選擇實(shí)驗(yàn)報(bào)告所要包含的內(nèi)容；點(diǎn)擊右上方“PDF”按鈕將報(bào)告保存為*.pdf文件。
8、儀器使用完畢后，取出反應(yīng)板，關(guān)閉LightCycler480儀器電源，退出LightCycler480應(yīng)用軟件。
注意事項(xiàng)：
1、儀器自檢過程切勿放入反應(yīng)板；若自檢未通過，導(dǎo)致多孔板加載器故障不能收回，請及時聯(lián)系工作人員，切勿私自處理。
2、必須使用儀器配套的96孔PCR板。
3、儀器電腦開啟需密碼權(quán)限，請于工作日（8:00-17:30）預(yù)約使用。
3、參數(shù)設(shè)置注意檢查再運(yùn)行，特別是“Acquisition Mode”選擇信號采集方式一定要記得選擇。
4、嚴(yán)禁在存放本機(jī)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)揭開使用后的PCR板貼膜。
5、實(shí)驗(yàn)若需提前終止，請點(diǎn)擊“End Program”鍵。
6、拷貝數(shù)據(jù)，需提前將U盤格式化后再使用。
7、儀器出現(xiàn)任何故障，及時聯(lián)系工作人員。
